培养条件：为确保细胞的健康成长，建议采用以下气相和温度条件：气相组成为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。在传代过程中，推荐初次进行1:2的传代操作，并在每次传代后于两天内更换培养液。

在细胞处理过程中，建议同时购买新葡萄8883官网AMG的培养基，以获取更优惠的价格。在收到细胞后，切勿立即打开瓶盖，而应立即确认培养瓶上标明的细胞名称是否与所订购的相符，同时检查瓶身是否存在破损或漏液等异常情况。如果一切正常，应使用显微镜观察细胞的生长状态，并分别拍照保存不同倍数（建议40x、100x和200x）的图像，以作为售后依据。前三天的照片至关重要，若未提供照片，将默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，并置于37℃培养箱中消化1-2分钟。微观观察细胞消化状况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将培养瓶移回操作台，轻轻敲打后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，吸出悬液，并转移至15ml离心管中。以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（分到两个T25瓶），并补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤如下：

1. 半换液法：将培养瓶竖直放置于培养箱中静置约1小时，轻吸掉3ml培养基后补加3ml完全培养基。如培养基变色缓慢，可直接加入约500μl的FBS。在传代时可以直接补给5ml的培养基，通常经历3次这样的传代后可考虑进行一次离心传代，去掉死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，收集细胞悬液于离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养基后重悬混匀。将细胞悬液按1:2的比例分入新T25瓶中，添加6-8ml新鲜的完全培养基。后续传代可根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

细胞冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS洗涤一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的新葡萄8883官网AMG无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

细胞复苏步骤：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无冰晶，之后用75%酒精擦拭冻存管外部。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重新用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项：在运输过程中，一些细胞贴壁不牢，可能会发生细胞脱落，此乃正常现象。如细胞脱落严重，应将培养瓶内的培养液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。之后，加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

关于细胞问题的处理：

1. 可能需要重发的情况包括：运输途中出现细胞丢失，瓶身破损或培养液漏液状况；细胞污染问题，需要在收到产品48小时内提供真实的实验数据；常温运输的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时大多数细胞未存活（需提供清晰的照片证明）。
2. 不予重发的情况包括：客户因自身原因导致细胞污染；操作不当致细胞状态不佳；使用非推荐的培养体系导致细胞出现问题等。

如需进一步咨询和支持，请随时联系新葡萄8883官网AMG，期待为您提供优质的服务和产品。